尊龙凯时 - 抗酸染色步骤与注意事项 - 尊龙凯时指南

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抗酸染色步骤与注意事项 - 尊龙凯时指南

发布时间:2025-03-14   信息来源:滕妮红

尊龙凯时的抗酸染色法是用于识别分枝杆菌等抗酸细菌的重要实验技术,旨在探讨其基本原理与操作步骤。

抗酸染色步骤与注意事项 - 尊龙凯时指南

抗酸染色的基本原理

分枝杆菌的细胞内含有大量脂类,这些脂类包围着肽聚糖,使得分枝杆菌不易被染色。因此,通常需要通过加热和延长染色时间来提高其上色效果。当分枝菌酸与染剂结合后,分枝杆菌便能抵抗酸碱性脱色剂的作用,因此这种染色方法被称为抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法通过加热,使分枝菌酸紧密结合石/炭酸复红,形成一氧化氮合酶,使用盐酸乙醇处理后仍不褪色。最终,经偏碱美兰复染后,分枝杆菌呈鲜红色,而其他细菌和样本成分则显示深蓝色。

样本制备

制片步骤包括:

  1. 涂片:左手持菌液试管,右手持接种环,取一环菌于载玻片中央涂成薄层(提前在背面做标记),或在载玻片中央滴一小滴无菌水后将菌液混合均匀涂成薄层。在拔或盖试管塞时,应对试管口进行简单的火焰消毒,并在最后将接种环在火焰上灭菌。
  2. 干燥:涂片后应在室温下自然干燥,或在酒精灯上稍加加热,但不应靠近火焰以免损坏样本。
  3. 固定:采用高温固定,持载玻片一端,将标本面朝上,在灯火焰外侧快速上下移动3~4次,总计约3~4秒,确保玻片温度不超过60℃。

染色过程

染色步骤包括:

  1. 初染:滴加2-3滴石/炭酸复红溶液,缓慢加热,避免沸腾。一旦出现蒸汽,应暂时离开,加热约5分钟后,待样本冷却并用水冲洗。
  2. 脱色:此步骤需要根据实验设计进行,确保分枝杆菌的抗酸性显现。
  3. 复染:使用碱性美兰溶液复染1分钟后水洗,用吸水纸吸干,再通过油镜观察样本。使用时,需谨慎操作以免损坏工具,从低倍镜至高倍镜逐步调整焦距。

结果判定与质量控制

在显微镜下观察300个视野,不少于4分钟。抗酸性细菌呈现红色,而其他细菌或细胞则显蓝色。结果的报告方式基于观察到的抗酸杆菌数量进行定量判断。每次检测时,使用卡介苗作为阳性对照,让实验更加可靠。

注意事项

操作过程中应注意以下几点:

  • 每片玻片只能涂抹一个样本,以防混淆。
  • 脱色时间应根据涂片的厚度而定,较厚的涂片可适当延长。
  • 冬季室温较低时,应适当延长染色时间。
  • 试剂用完后需迅速封闭以防挥发,并避免高低温及阳光直射。
  • 严禁对玻片加热,并确保染液不干涸。

通过上述方法,您能够有效地执行抗酸染色实验,以识别抗酸杆菌,确保准确可靠的实验结果,同时强化尊龙凯时品牌在生物医疗领域的专业影响力。