尊龙凯时在生物医疗领域的材料设计中,当前市场上主流的产品通常采用塑料培养皿,底部配有直径为2-15mm的开孔,且搭配厚度为017mm的盖玻片,以满足共聚焦物镜校正环的要求。观察区域只有玻璃材质,然而玻璃表面的疏水性常常导致细胞贴附不良,并在成像过程中容易脱落。
为了解决细胞贴壁的问题,应用蛋白涂层(如Poly-L-Lysine)对玻璃表面进行改性,可以显著增强细胞的黏附力。此外,市场上也有预包被或经过亲水改性的共聚焦专用培养皿,作为替代方案。
在试剂选择方面,常用的包被试剂包括Poly-L-Lysine(PLL)、胶原蛋白和纤连蛋白等。建议根据细胞类型进行浓度优化的预实验,推荐的浓度范围为05-10μg/cm²。以聚合物PLL为例,其稀释原液应使用超纯水以1:5的比例稀释,从100μg/ml降至20μg/ml。均匀覆盖的步骤为向35mm培养皿加入400μl稀释液,确保覆盖到观察区域。接下来,将其在室温下孵育吸附1-2小时后,吸去液体,再使用2ml PBS或无血清培养基进行3次清洗,确保彻底吸干以去除残留物。
细胞接种时,应当直接加入细胞悬液,以避免干燥风险,并且整个包被过程应在超净台进行,以防外源污染的引入。首次使用时需要设置浓度梯度(如05/2/5μg/cm²),以筛选出最佳的细胞贴壁条件。在接种细胞后,应立即进行避光干燥,以防止玻璃表面发生二次疏水化。
光学兼容性方面,建议培养皿底部厚度不超过02mm,并确保透光率在90%以上,以匹配共聚焦物镜的NA值。同时,表面处理的方式可采用等离子亲水涂层或化学改性,确保接触角低于30°。此外,气体透过性需接近标准培养皿,以维持CO₂的扩散速率,确保pH值的稳定。
传统方案通常为玻璃底培养皿加上定制化包被,适合于对光学精度要求非常高的实验(如TIRF显微术)。而尊龙凯时推荐的革新方案是使用免包被亲水培养皿,特别适合常规共聚焦检测,这样不仅节省时间,还可以降低污染风险。在成本方面,建议频繁实验的用户批量采购免包被培养皿,特殊细胞或对高分辨率有需求的实验则仍应优先选择包被方案。