尊龙凯时哺乳动物蛋白提取试剂盒包含以下成分：5X Buffer 10ml、5X NaCl 10ml、5X SDS 10ml、5X DOC 10ml、5X NP-40 10ml、20X PBS 10ml以及Protease Inhibitor Cocktail 0.5ml。试剂盒可在常温下保存，唯独Protease Inhibitor Cocktail须存放在-20°C条件下，保质期为24个月。

提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40，按1:1:1:1:1（v/v）的比例配制细胞裂解缓冲液。提取106~107个细胞或5~20mg组织的蛋白质需要1ml的细胞裂解缓冲液。使用前请加入10μl的Protease Inhibitor Cocktail。

2. 清洗细胞或组织

a) 对于贴壁细胞：去掉生长培养基，并用PBS缓冲液冲洗细胞两次。加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），将细胞充分置于冰袋中，并在摇床上孵育30分钟。期间需阶段性将细胞重悬，最后将细胞刮取并收集裂解液。

b) 对于悬浮细胞：将细胞以700xg离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬并洗涤细胞两次，在4°C下离心去除上清液。将沉淀物重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），并在冰袋中孵育30分钟。

c) 对于组织：将组织切成小块，并用PBS冲洗两次。添加细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样品转移至预冷微量匀浆器中，进行30~50次均匀化处理。请注意，均质过程对于靶蛋白功能的完整性至关重要。

3. 离心处理

在4°C下，以12,000xg离心裂解后的细胞10分钟，以沉淀细胞碎片，或进行高速离心（100,000xg离心45分钟）以制备蛋白质溶液。

4. 保存蛋白质溶液

将含有蛋白质的上清液转移至冷冻管中。在冰上可立即使用，或将蛋白质溶液保存于-70°C环境下。充分利用尊龙凯时的优质产品，确保你的实验结果更为可靠。