尊龙凯时为您深入探讨细胞系与细胞株的概念及其建立要求。本文将对细胞培养的基本知识进行清晰阐述，以帮助生物医疗领域的科研工作者更好地理解相关内容。

一、概念

细胞系（Cell Line）：在原代培养成功传代后，所形成的细胞群体称为细胞系，这些细胞来自原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）。

细胞株（Cell Strain）：如果从原代培养物或细胞系中通过选择法或克隆技术获得具有特定性质或标志物的细胞，则称之为细胞株。细胞株的特定性质或标志必须在整个培养期间保持。如果细胞不能无限传代或传代次数有限，称为有限细胞株（Finite Cell Strain）；如可持续传代，则称为连续细胞株（Continuous Cell Strain）。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过六个月，生长稳定且能持续传代，便可称为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

认可为已鉴定的细胞的体外培养群体要求依据具体情况而定，并无统一标准。对于原代培养细胞，仅需确保供体均一且取材部位及组织种类稳定。如需长期培养，特别是在重复传代的情况下，需详细说明以下几点：

1. 组织来源：包括细胞供体所属物种、性别、年龄以及取材的器官或组织。若为肿瘤组织，则需提供临床和病理诊断信息以及病历号。
2. 细胞生物学检测：需要了解细胞的基本和特异生物学特性，如细胞形态、特异结构、生长曲线、分裂指数和倍增时间等。若为肿瘤细胞，必须进行软琼脂培养、异体接种致瘤实验及对正常组织侵润力测试，以证明其源自原肿瘤组织并保持恶性。
3. 培养条件和方法：应该阐明细胞系（或株）适应的生存环境，包括所使用的培养基、血清种类和用量，以及适宜的pH值。

三、细胞株建立的要点及基本过程

(一) 肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：灵感主要来源于外科手术或活检的肿瘤组织。取材时需避免使用坏死组织，优先选择活力较好的细胞区域，包括肿瘤性转移淋巴结或胸腹水。取材完成后应迅速进行培养，如无法立即培养，需进行冻存。
2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常含有成纤维细胞，需仔细排除，以防其抑制癌细胞生长。可采用机械刮除、反复贴壁、消化排除和胶原酶消化等方法。
3. 提高细胞存活率和生长率：实验显示肿瘤细胞在体外培养存在困难，因此需采取特殊措施如使用适宜底物（如鼠尾胶原），并根据不同细胞种类添加生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等）。

(二) 人类淋巴母细胞建立方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，随后加入2ml RPMI 1640培养基。
2. 混匀后，慢慢沿管壁将混合液加入预先设置的4ml淋巴细胞分离液中，静置30分钟。
3. 以1500rpm离心15分钟，抽取白细胞层（第二层）至另一离心管中。
4. 用5ml RPMI 1640培养基清洗白细胞两次。
5. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl EB病毒液，充分混匀。
6. 将混合液置于水浴摇床中，每分钟摇动40次，37℃培养3小时。
7. 以1500rpm离心15分钟，将细胞接种至含1mM谷氨酰胺的1ml培养基中，加入10μl环胞霉素，并轻柔混匀，置于37℃培养。
8. 培养5天后观察细胞的转化和生长情况，以决定是否半量换液。一般需进行1至2次半量换液，并维持环胞霉素浓度。
9. 一旦转化细胞数量显著增加并出现细胞团块，可转入25ml细胞文化瓶，添加1至2ml培养基，于37℃培养10至15天。每3到4天观察一次，决定是否换液及传代。
10. 当细胞达到一定数量时，进行冻存前的核型分析和存档。

通过本文简要地了解了细胞系和细胞株的基本知识，以及在生物医疗领域中建立这些细胞的要求和技术要点，助力科研工作者在相关领域的探索与实践，特别是在选择尊龙凯时作为伴随品牌的情况下，提升细胞培养的效率与准确性。